ГЕМОТРАНСФУЗИЯ У ЖИВОТНЫХ.
Галина Дмитриева , Ph.D. Agricultural, заведующая лабораторией; Дан Раттнер, Ph.D. Biology; Моше Гиберштейн; НИИ Животноводства, кибуц ««Лахав», Израиль.
АННОТАЦИЯ.
В качестве медико – биологического объекта для проведения экспериментальных исследований, всё чаще используют свиней.
В ряде экспериментов, особенно в областях хирургии и трансплантации необходима гемотрансфузионная терапия. Однако. Этот вопрос у животных практически не изучен.
Тема настоящих исследований посвящена выявления влияния эритроцитарных антигенов и контролирующих их систем на результаты гемотрансфузий у данного вида животных.
Для решения поставленных задач создан банк тест-сывороток, позволяющий идентифицировать более 60 антигенных факторов крови, относящихся к 14 генетическим системам.
Переливание крови проведено 176 реципиентам. Результаты исследований свидетельствуют. Что для сведения к минимуму риска гемотрансфузных осложнений, необходим учёт кровегрупповых характеристик донора и реципиента. Наибольшую опасность представляют несовместимость их по « А» системе групп крови. Следует также контролировать антигенные различия донора и реципиента по М, L, I, J системам.
В современных биологии, медицине, фармакологии, косметологии и пр., для проведения
Экспериментальных исследований и отработки методик в качестве модели всё чаще используют свиней.
Во-первых, они схожи с человеком анатомически с похожими биохимическими и физиологическими процессами. Во-вторых, по своему развитию на ступень ниже приматов, менее дорогостоящие и более плодовитые.
Значительная часть экспериментов , особенно в областях хирургии и трансплантации, сопряжена с необходимостью гемо трансфузии от результатов которой напрямую зависят результаты эксперимента.
Переливание крови у людей сегодня базируется на теоретических знаниях, богатом клиническом опыте и высоких технологиях. В ветеринарии до настоящего времени этому вопросу не придавали значения. Так как было не актуально. При проведении трансфузий животным либо вообще пренебрегали возможностью имунноконфликта, либо для подбора донорской крови использовали серологическую ( антиген – антитело) реакцию и биопробу.
Указанные тесты не позволяют достоверно определить имуносовместимость донора и реципиента, а следовательно избежать иммунноконфликтной ситуации.
Переливание крови – серьёзная операция по пересадке алло- и аутогенной ткани и только научные знания позволят свести к минимуму гемотрансфузионные осложнения.
Учитывая возросший интерес к данному вопросу применительно к свиньям как к медико-биологической модели, нами проведены исследования, цель которых выявить эритроцитарные антигены и детерминирующие их локусы, вызывающие иммунноконфликт при гемотрансфузии.
ЭКСПЕРИМЕНТ.
Опыты проведены на молодых ( 5 – 6 месяцев) не сенсибилизированных клинически здоровых животных , которых аттестовывали по группам крови. По результатам аттестации подбирали пары донор – реципиент с минимальными антигенными различиями.
Каждый антигенный фактор проверяли в 15-20 вариантах подбора, где испытуемый фактор являлся для реципиента чужим в различных сочетаниях с другими.
Иммунносовместимость укомплектованных пар предварительно устанавливали общепринятыми в мировой ветеринарной практике тестами, то есть серологическим и биологическим. При наличии положительной реакции в любом из них, донора меняли и вновь выявляли его совместимость с реципиентом. К трансфузии допускали пары, где иммуннотолерантность реципиента к крови донора подтверждалась указанными тестами.
У всех подопытных животных выявляли наличие и уровень естественных изоантител. Иммуннореактивность реципиентов определяли по динамике титра антител в сыворотке крови посли их сенсибилизации эритроцитами донора при проведении биопробы.
Переливание крови проводили под общим наркозом. Цельную донорскую кровь ( 500 мл ) вводили через иглу-катетер капельно в ушную вену. Клиническое состояние реципиента оценивали по следующим параметрам: температура тела, частота пульса и дыхания, цвет кожного покрова и склеры глаз. При незначительных отклонениях в клинике трансфузию останавливали и продолжали после восстановления. При острых осложнениях с нарушением жизненно важных функций вливание прекращали.
В течение двух недель вели наблюдение за состоянием животных. Уровень антител в сыворотке крови реципиента к антигенам донора определяли через 7 и 14 дней после трансфузии. Серологический анализ, биотест, иммуннизацию и реиммуннизацию при получении тест-сывороток, проводили по общепринятым методикам.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
К настоящему времени у свиней идентифицированы 17 систем групп крови, определяющих более 80 генетических вариантов эритроцитарных антигенов. Их идентификация возможна только при наличии реагентов, специфичных к определённым антигенам. Следовательно, на первом этапе стояла задача создания банка сывороток реагентов.
В результате серии иммуннизаций и реиммуннизаций нами получены тест-сыворотки, содержащие антитела к 23 антигенным факторам групп крови. Сравнительные испытания, подтверждающие их специфичность, проведены в ряде ведущих лабораторий мира ( Швеции, Чехии, России). Часть недостающих реагентов была любезно предоставлена нам Институтом физиологии и генетики животных Чешской академии наук и ВНИИРГЖ России.
В настоящее время в созданном банке имеется 61 реагент с известной специфичностью и 4 моносыворотки с неустановленной спецификой. По механизму действия это агглютинины ( полные и неполные) и гемолизины.
Полученные реагенты позволили нам идентифицировать более 60 антигенов ( из 80 известных) и 14 генетических систем групп крови.
Переливание крови проведено 176 реципиентам.
Несовместимость по системе «А» во всех проведённых экспериментах приводила к летальному исходу. Причём смерть наступала после введения 20-50 мл крови «А»-положительного донора к «А»-отрицательному реципиенту. Следует отметить, что предварительная проверка свидетельствовала об их иммунносовместимости.
«А» система крови, несмотря на то, что она была открыта первой, до сих пор остаётся самой непонятной. Как свидетельствуют исследователи, антиген «АА» свиней имеет иммуннологическое сходство с антигеном «А» человека. В отличие от других он отсутствует у плодови новорожденных, поэтому типирование молодняка свиней до месячного возраста не всегда даёт правильные результаты. В сыворотке крови «АА» — отрицательных животных, начиная с трёхмесячного возраста, примерно в 50-60% случаев присутствуют естественные антитела к данному антигену.
Следовательно, при выявлении иммунносовместимости пар с использованием только серологического и биологического тестов, особенно у молодых животных, вероятность получения недостоверных результатов достигает 40-50%. Носителями данного антигена являются от 20% до 50% животных в зависимости от их породной принадлежности.
Чёткой закономерности относительно влияния антигенов других систем на неблагоприятный исход гемотрансфузии не прослеживалось. К минорным можно отнести системы «B, C, N».
Высокий процент гемотрансфузных осложнений ( в 40% — 43%) случаев отмечен при наличии антигенных различий по» M,L,I,J » системам. Незначительное число проверок не позволяет нам сделать какие-либо выводы относительно «L, Fd, Hd, Lb, Ke» антигенов.
Тяжёлые осложнения наблюдались у 7,9 %, осложнения средней тяжести у 1,9% и лёгкие у 17,8% реципиентов.
По имеющимся в литературе данным, при подборе донора в первую очередь следует обра щать внимание на иммунногенные антигены. У свиней таковыми являются » AA; Fa; Ea, d, e; Kac – антигены. Однако, как свидетельствуют данные эксперимента, кроме «АА» антигена, иммуннонесовместимость по указанным факторам существенно не влияет на исход трансфузии.
ВЫВОДЫ.
Неблагоприятные реакции при переливании крови по симптоматике можно разделить на иммуннологические и не иммуннологические, причём все наблюдаемые отклонения от нормы проявлялись в процессе трансфузии. Следует отметить, что для проведения гемотрансфузной терапии подбор пар «донор – реципиент» только по результатам кросс-реакции и накожной пробы не гарантирует положительных результатов. Наряду с указанными тестами, следует выявлять носительство «АА» антигена у донора и учитывать генотипические особенности по «M; L; I; J» – системам.
